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碘化丙啶染色(PI Stain)可以對細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡進行分析,碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種可以嵌合到雙鏈DNA和RNA的堿基對中并與之結(jié)合的熒光染料,無堿基特異性。碘化丙啶與雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比,細(xì)胞內(nèi)的DNA被Propidium Iodide染色后可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進行DNA含量測定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可以進行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強度為1~2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失,因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細(xì)胞峰。
細(xì)胞凋亡時流式細(xì)胞檢測可呈現(xiàn)亞二倍體核型的特征,根據(jù)光散射的特點,PI染色可以區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死的細(xì)胞峰型。細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)凋亡細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的前向光散射低于正常;在細(xì)胞凋亡的早期細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低,對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化;在細(xì)胞凋亡的晚期前向和側(cè)向光散射的信號均降低;細(xì)胞壞死時細(xì)胞多表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹,因此前向光散射高于正常,對側(cè)向光散射高于正常。
Leagene碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)主要由PI、破膜劑等組成,經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測, 亦可用于區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死,其工作濃度多為20~50μg/ml,不含RNase,推薦用于RNA染色,細(xì)胞檢測含量范圍一般為0.1~1×106之間。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。